努力不一定會成功, 但成功一定需要努力!: 4月 2016

2016年4月30日星期六

新手上路看CPE (Cytopathic effect)

剛開始要做病毒培養時，最擔心的就是怕自己沒有看出CPE (Cytopathic effect)，那麼看CPE有哪些要注意的呢?

看CPE的第一條守則就是「記得要先看blank (陰性對照細胞)」，每天接種檢體時，我們會同時放一組blank一起培養，當你不確定這個變化到底是不是CPE時，把它跟blank放在一起對照著看，看blank是不是也有一樣的變化，會很有幫助，因為細胞會老，而且培養的環境跟細胞的狀況等等，都會影響到細胞的形態，因此，只要blank也有的，就不用太擔心它是CPE，當然如果真的有懷疑，還是可以先做記號，多觀察幾天，千萬不要心急，因為太早染色容易槓龜，看得太慢, 常常一不小心就整排細胞都做了記號，所以盡量以正常的速度看過去, 覺得怪的, 就做記號, 但, 正所謂師父領進門，修行靠個人，如何減少不必要的記號，就要靠經驗的累積了, 不要害怕槓龜, 槓龜是正常的, 因為細胞是活的, 病毒是活的, 不同的條件下出現的CPE必然不會一模一樣, 凡事都有例外!

看CPE的第二條守則就是「如果是CPE，一定會變多」，有時細胞會因為某些因素，也可能因為檢體本身造成的一些變化，一開始真的會非常困擾，此時，又是作記號的時候了，看看它有沒有變多，如果真的是CPE，一定會變多，如果這樣的變化已經嚴重影響到細胞的生長時，那麼，就種第二代 (把病毒接種到新的細胞)，如果真的是CPE，它很快就會再出現的

在HEL上，看起來像是有變化，但是待觀察的細胞

接下來，我們來看看一些可惡的冒牌貨，它們其實不是CPE，但是最愛唬弄新人

HEL上粘了一些檢體細胞，跟CPE的區分方法 -- 不會變多，與細胞不在同一個焦距上

HEL上偶發出現的細胞紋路，通常同一批細胞都會出現，可跟blank對照看

MK-2細胞因為本身有內生性病毒，因此都會出現這樣的CPE，這不是我們要找的檢體CPE

MDCK本身就有的紋路

HEp-2細胞老化很快，因此經常會看到很多變圓的細胞浮在上面，此時我們要注意看的是下方的多角形細胞是否都還完整

HEp-2 的老化細胞也是會變圓的 (照片上箭頭指的那些)，注意看，變圓的細胞下面，多角形都還在，並沒有變化，不是CPE，下面如果不好看，也可以看邊緣

從相同的細胞上找出真正的CPE之後 (就是找出不一樣的那支) , 除了依照CPE的形態來推測它是什麼之外, 接下來就是檢視同一個檢體的不同細胞的變化, 找出一支適合拿來染色的, 同時也可幫助確認自己的推測是否正確, 有些病毒在別的細胞上會有不一樣的CPE, 有些病毒的特色就是只在特定的細胞上會長CPE (如CMV, VZV, 只會在HEL上有變化, HEp-2, RD等細胞就不會有變化)

以下另外附上一些其它細胞及CPE的照片連結:

1. 一些正常細胞的照片, 常用的細胞株及其來源
2. hemadsorption test, HAd (血球吸附試驗 )
3. Adenoviruses (腺病毒)
4. Varicella-Zoster virus, VZV （水痘帶狀疱疹病毒）

5. Respiratory Syncytial Virus (RSV, 呼吸道融合病毒)
6. Respiratory Syncytial Virus (RSV, 呼吸道融合病毒)在HEp-2細胞的照片

7. Cytomegalovirus (CMV, 巨細胞病毒)

8. 腸病毒 (Enterovirus)

9.細胞培養的操作影片

這些經驗分享, 講起來很簡單, 但是實際上的變化還是很多, 槓龜事件還是經常發生, 經驗需要慢慢累積, 或許在這科技日新月異的時代, 等我終於不會再槓龜的時候, 病毒也都不需要培養了......不論如何, 管好眼前的每一天, 也對每一天的自己負責, 好好的把自己每一天的工作做好就好, 明天的事, 誰能預料呢! 今天的努力, 或許現在沒有收穫, 誰又知道在未來的哪一天, 不會派上用場呢!

2016年4月28日星期四

CPE照片分享 - Respiratory Syncytial Virus (RSV, 呼吸道融合病毒)

l Family: Paramyxoviridae (副粘液病毒科)，subfamily : Pneumovirinae

l Single-stranded RNA virus, 120-200 nm (0.12-0.2μm)

l 因為在病毒表面的F proteins會造成細胞融合的現象，因而取名為Respiratory Syncytial Virus (RSV, 呼吸道融合病毒)

l 兒童二歲前幾乎都會感染，症狀較成人嚴重，可能引起細支氣管炎；成人感染時，症狀較輕微，像鼻竇炎的感冒或沒有症狀

l 潛伏期4~6天，疾病表現期7~10天，病毒排放時間5～12天，甚至有長達三星期或更久，急性症狀之前2~4天最具感染力。傳染途徑主要是飛沬感染或接觸感染。

l HEL 細胞於接種檢體後，約兩天至二週出現細胞病變，細胞呈胡椒粒狀。HEp-2 細胞於接種檢體後，約兩天至二週出現細胞病變，細胞融合。

如果說CMV是我覺得CPE很容易辨認的病毒，那麼RSV的CPE就是我覺得有點難的病毒，HEp-2 及MK-2上的CPE我還沒有機會拍到照片，因為我是最近才開始學會拍照的 (而且之前剛開始學病毒培養，每天只有如火如荼的加班啊……)，HEL上的CPE看起來有點像爛掉或污染的細胞，需要確認不是因為細菌污染造成的變化，還要確認不是因為檢體而造成的細胞中毒，前者要看培養管的底部是否有細菌存在，後者可以把病毒接種到新的細胞，如果真的是病毒，就一定會再產生相同的細胞病變，如果只是檢體造成的中毒現象，就有可能因為接種到新的細胞而得到緩解，聽起來是簡單的兩句話，但這些都是學姊多年的珍貴經驗啊!! 不論是細菌或是病毒，因為是活的，就會有許多的變化，而不是像生化反應那樣，陽性或陰性那麼明確，多年的經驗累積出來的是許多自然的反射動作，但對新人來說，就像一座挖不完的寶藏

HEL上的CPE如下圖