努力不一定會成功, 但成功一定需要努力!: 4月 2017

2017年4月13日星期四

病毒培養簡介

更新日期: 2017/10/9

把之前拍的一些正常細胞的照片整理了一下，加上註解做成一個照片集錦重新發佈，順便大概介紹一下病毒培養，不過後來新發的文裡都有重覆寫過，想說這樣整篇文章比較完整，不會變成單獨看一篇文章看不懂

病毒培養的檢驗是經由讓病毒感染特定的細胞之後，病毒在細胞內增殖，使細胞產生特殊的細胞病變，表現為細胞皺縮、變圓、出現空泡、融合、死亡和脫落，稱之為細胞病變效應(cytopathic effect; CPE)。以光學倒立顯微鏡來觀察上述細胞病變，再用免疫螢光法(immunofluorescence assay; IFA)染色做確認，在螢光顯微鏡下可見黃綠色螢光，依所選用抗體的特異性，即可正確判斷為何種病毒感染

常用在病毒培養的細胞，其中五種，如下
1. HEL ( Human Embryonic Lung Cell )
Organism: Homo sapiens, human / Tissue: lung

2. HEp-2 ( Human Epithelial Cell-2 )
Organism: Homo sapiens, human / Tissue: HeLa contaminant

3. RD ( Rhabdomyosarcoma Cell )
Organism: Homo sapiens, human / Tissue: muscle

4. LLC-MK-2 ( LLC-Monkey Kidney Cell-2 )
Organism: Macaca mulatta, monkey, rhesus / Tissue: kidney

5. MDCK ( Mardin-Darby Canine Kidney Cell )
Organism: Canis Familiaris / Tissue: kidney

對於無細胞病變(non-cytopathogenic)或只有輕微細胞病變之病毒，特別是parainfluenza及mumps virus，可利用血球吸附試驗 (hemadsorption test, HAd)來檢測其存在

如何看病毒培養的 CPE請參照另外一篇新手上路看CPE

血球吸附試驗 (hemadsorption test, HAd)

更新日期: 2017/12/31

血球吸附試驗 (hemadsorption test, HAd)

流感病毒和某些副粘液病毒在感染細胞後24-48小時，新合成的血球凝集素 (hemagglutinin, H) 表現在細胞膜上，能吸附天竺鼠、雞等動物及人類的紅血球，而產生紅血球吸附現象。對於無細胞病變或只有輕微細胞病變之病毒，利用血球吸附現象，可以檢測病毒的存在；對於有細胞病變的病毒，亦可藉之早期偵測。

資料來源: https://www.nics.org.tw/old_nics/magazine/16/02/16-2-7.htm

以下照片中的HAd是使用天竺鼠的紅血球，在正立光學顯微鏡下所觀察到的血球吸附現象

HAd Test陽性：MDCK細胞 monolayer 上吸附有RBC

HAd Test陰性：MDCK細胞 monolayer 沒有吸附RBC

以下照片為HAd Test陽性：MK-2細胞 monolayer 上吸附有RBC
螢光染色結果為Parainfluenza II

HAd Test陽性：MK-2細胞 monolayer 上吸附有RBC

感謝柏彰幫忙拍攝這些非常清楚的照片!

Influenza Viruses (流行性感冒病毒)

流行性感冒病毒分為A, B, C三型, 其中A型和B型對人類有較高的致病性, 由於A型具有 "antigenic shift", 抗原變異性大, 所以每隔數十年就會發生一次全球性的大流行, 1918年、1957 年、1968年以及1977年都曾發生過大流行，其中尤以1918年所謂“Spanish flu”的全球流行死亡最為慘重，造成至少 2 千萬人以上死亡，且死亡年齡層以二十至四十歲青壯年為主

流行性感冒病毒是有八條單股RNA的RNA病毒, 病毒的表面上有血球凝集素 (hemagglutinin, H) 和神經氨酸酶 (neuraminidase, N), 血球凝集素能幫助病毒附著在細胞上, 相反的, 神經氨酸酶則作用於病毒離開宿主細胞時, 兩者都被視為流行性感冒病毒的抗原, 並以此兩者作為病毒的編號，例如A型流感H1N1

CPE照片分享 - Adenoviruses (腺病毒)

Adenoviruses (腺病毒)

Ø 腺病毒具有雙股DNA，中等大小（90-100nm），無包膜的二十面體病毒。超過50種類型的免疫學特異性腺病毒可引起人類感染。

Ø 任何人都可能感染腺病毒，但大部份的病人並不會有嚴重的症狀

Ø 腺病毒的傳染途徑通常是經由觸摸或握手，咳嗽打噴嚏，或觸摸到物體表面上的腺病毒，然後再去觸摸你的嘴，鼻子或眼睛

Ø 腺病毒最常引起呼吸道疾病。疾病可以從普通感冒到肺炎，咳嗽和支氣管炎。根據類型，腺病毒可能會導致其他疾病，如腸胃炎，結膜炎，膀胱炎，較不常見的是神經系統疾病。

Ø 腺病毒目前並沒有疫苗

Ø 腺病毒對一些常見的消毒劑具有一定的耐受性，因此，在泳池中加入足夠的氯是很重要的，可防止由腺病毒引起的結膜炎的爆發

Ø 目前對腺病毒患者並沒有特別的治療。大多數腺病毒感染是輕度的，只需要緩解症狀

Ø 免疫系統較弱的嬰兒和人群，較容易因為腺病毒感染而引發嚴重疾病

Ø 腺病毒的感染可經由抗原檢測 (antigen detection)，PCR，病毒培養 (virus isolation) 和血清學來鑑定。腺病毒分型通常是利用血細胞凝集抑制和/或用特異性抗血清中和 (hemagglutination-inhibition and/or neutralization with type-specific antisera)或是用分生的方法 (molecular methods)

以上資料節錄自美國CDC網頁https://www.cdc.gov/adenovirus/

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病毒培養的檢驗是經由讓病毒感染特定的細胞之後，病毒在細胞內增殖，使細胞產生特殊的細胞病變，表現為細胞皺縮、變圓、出現空泡、融合、死亡和脫落，稱之為細胞病變效應(cytopathic effect; CPE)。以光學倒立顯微鏡來觀察上述細胞病變，再用免疫螢光法(immunofluorescence assay; IFA)染色做確認，在螢光顯微鏡下可見黃綠色螢光，依所選用抗體的特異性，即可正確判斷為何種病毒感染。以下是在做Adenoviruses培養時，其CPE在倒立顯微鏡下所觀察到的形態

以下照片中所用到的相關縮寫如下:

HEL ( Human Embryonic Lung Cell )

HEp-2 ( Human Epithelial Cell-2 )

CPE (Cytopathic effect)

Ad (Adenoviruses)

CMV (Cytomegalovirus)

Adenoviruses (HEp-2 cell) 的螢光染色

2017年4月12日星期三

CPE照片分享 - 水痘帶狀疱疹病毒（Varicella-Zoster virus；VZV）

水痘帶狀疱疹病毒（Varicella-Zoster virus；VZV）

水痘帶狀皰疹病毒Varicella-Zoster Virus (VZV)

Human alpha-herpesvirus

– 造成水痘（varicella）和帶狀皰疹（herpes zoster）

– 原發性VZV感染導致水痘

– 原發性VZV感染後，會潛伏在背根神經節（dorsal root ganglia）

– VZV復發時，會引發帶狀皰疹

– 在美國有3種許可的疫苗可以預防水痘（Varivax®，Proquad®）和帶狀皰疹（Zostavax®）

– Varivax® (1995授權)

– Proquad® (2005授權)

– Zostavax® (2006授權)

節錄自美國CDC於2013發表的文章，原文網址: https://www.cdc.gov/vaccines/vpd-vac/shingles/downloads/vzv_clinical_slideset_jul2010.pdf

Laboratory Testing

如果對VZV病毒培養以外的實驗室檢測方法有興趣 (如IgG ELISA等)，可參考美國CDC的網頁，網址如下

https://www.cdc.gov/chickenpox/hcp/lab-tests.html

在水痘復原之後，藉潛伏於寄主的神經節中，以避免被免疫系統摧毀。當宿主免疫力減弱時，病毒便會活化並沿其分布的神經皮節散布，則會造成帶狀疱疹，俗稱皮蛇（shingles）。屬於第四類法定傳染病。

節錄自衛生福利部疾病管制署

病毒培養的檢驗是經由讓病毒感染特定的細胞之後，病毒在細胞內增殖，使細胞產生特殊的細胞病變，表現為細胞皺縮、變圓、出現空泡、融合、死亡和脫落，稱之為細胞病變效應(cytopathic effect; CPE)。以光學倒立顯微鏡來觀察上述細胞病變，再用免疫螢光法(immunofluorescence assay; IFA)染色做確認，在螢光顯微鏡下可見黃綠色螢光，依所選用抗體的特異性，即可正確判斷為何種病毒感染。以下照片是在做Varicella-Zoster Virus培養時，其CPE在倒立顯微鏡下所觀察到的形態

HEL ( Human Embryonic Lung Cell ) 細胞受到VZV感染後，約數天後出現細胞病變，局部細胞變圓、大小不等，約再1至2天後，細胞變破碎，呈砂粒狀