2017年10月7日 星期六

腸病毒 (Enterovirus)

關於腸病毒 (Enterovirus)                                        (更新日期:2017/12/21)

l 腸病毒與鼻病毒 (rhinoviruses) 同屬於picornaviruses, 腸病毒包括:
1.  Coxsackieviruses A1-A21, A24, B1-B6
2.   Echoviruses (enteric cytopathic human orphan viruses) 1-7, 9, 11-21, 24-27, 29-33
3.   Enteroviruses 68-71, 73-91, 100-101
4.   Polioviruses types 1-3
l  腸病毒可經由呼吸道的分泌物或腸道排泄物排出, 有時可存在於患者的血液或CSF

       參考資料:


l  腸道病毒(Enterovirus)又稱腸病毒,是一種主要寄生於腸道的RNA病毒,雖然名為腸病毒,在人類卻很少出現腸道的病狀。在病毒分類中,屬於第IV類的RNA病毒。腸道病毒的命名主要以它的英文名稱「Enterovirus」的英文簡寫「EV」,再後綴以數字命名。例如,近年在亞洲和北美洲流行、可以引起手足口病的EV71就是其中的一種。


l   腸病毒全球皆有分布,而人類是唯一宿主及唯一感染源。 腸病毒具高傳染性,主要經由兩途徑傳染
1.        經由到被汙染的食物、水、玩具、口水等
2.        經由呼吸道(飛沫、咳嗽 )傳染
故為了避免被感染應經常正確洗手尤其吃東西前一定洗手、不吃生食、兒童玩具經常清洗與消毒、室內保持良好的通風環境、流行期間避免到公共場所、感染者盡量在家休息至少3-5天,都是預防腸病毒感染有效途徑。

l   大部分的腸病毒感染之臨床症狀都是輕微的類流感症狀,如發燒、喉痛、頭痛 、噁心 等,典型的皰疹型咽峽炎(herpangina)手足口病(hand-foot-mouth disease)有時亦可見。
1.        皰疹型咽峽炎: 典型特徵為於咽峽部會出現潰瘍或小水泡。
2.        手足口病: 典型特徵為在手、腳、口腔有隆起紅疹與水泡。

l   大部分的腸病毒感染都屬於自限型疾病 (即病程發展到一個程度, 能自動停止, 只需症狀治療或不治療, 靠自身免疫力可自行痊癒) ,給予保守性的療法如控制發燒、疼痛及適當補充水分、足夠休息等即可控制病情。但少部分兒童尤其是五歲以下兒童,腸病毒感染可能會併發重症,尤其是感染腸病毒71最多見,次為克沙奇病毒。故如有皰疹型咽峽炎或手足口病之特異症狀,又合併出現以下重症症狀時應儘速就醫:
1.        神經系統症狀包括嗜睡、意識改變、持續噁吐、肌躍型抽槒(myoclonic jerk)、急性肢體麻痺症候群或其他腦炎、腦膜炎症狀。
2.        心肺系統症狀包括呼吸急促、呼吸困難、心跳過快、臉色蒼白、發紺、甚至心肺衰竭。

l   腸病毒的實驗室診斷:

n   molecular testing 分子檢測
n   serotype identification 血清型鑑定
n   sequencing 定序
n   virus isolation 病毒培養
參考資料: CDC

l   培養腸病毒可以使用的細胞:

n   primary African green, cynomolgus or rhesus monkey kidney cells (AGMK, CMK, RMK)
n   rhesus monkey kidney (LLC-MK2)
n   African green monkey kidney (Vero, BGMK, GMK)
n   Madin Darby canine kidney (MDCK)
n   human diploid cells lines (MRC-5, WI-38, SF)
n   human embryonic kidney (HEK)
n   human embryonic fibroblast (HEF)
n   human epithelial carcinoma (HEp-2)
n   human rhabdomyosarcoma (RD)

腸病毒在不同的細胞株生長的能力差別很大, 因此如果可以至少使用三種以上的細胞株來接種, 比較能提高分離率

很多腸病毒能在RD細胞生長, Polio coxsackie B viruses通常能在HEp-2上生長, 並產生CPE

WHO建議, 使用以下兩種細胞株可以提高polioviruses的分離率:
1.        L20B cells, a genetically engineered mouse cell line expressing the human poliovirus receptor
2.        RD cells, derived from a human rhabdomyosarcoma

參考資料: CDC Enterovirus Surveillance Guideline


腸病毒Enterovirus的螢光染色

  • Enteroviurs (RD細胞)的螢光染色:

腸病毒在RD細胞上的CPE是會變圓變小, 因此螢光染色上看到的RD細胞會很一致的小小的, 而且其螢光亮點是像芝麻在燒餅上一樣, 很均勻的分布在細胞上 , 不同的細胞會有不同的CPE, 其螢光染色的型態也會不同

如果看到細胞都是大大的, 那麼, 就有可能是偽陽性 (非特異性的螢光), 如果有些是很典型的小小的細胞, 另一些是變大的, 也有可能是同時感染了兩種病毒, 要特別注意一下其他細胞是否有不同的CPE

RD細胞上Pan -EV的螢光染色


RD細胞上Pan -EV的螢光染色 (紅色的是陰性的細胞)




  • 非特異性的螢光:

這些螢光不是點狀的, 有些呈塊狀, 而且很不均勻
非特異性的螢光

這些亮點完全不在細胞上, 而且大小很不均勻
非特異性的螢光


螢光不是均勻點狀的, 螢光亮度很低, 只是淡淡的綠色
非特異性的螢光 (RD HSV染Pan EV)

  • Adenovirus (HEp-2細胞)如果染Pan-EV的螢光染色, 也可能出現非特異性的螢光亮點, 其亮點是成一小塊一小塊的, 並不是均勻的像芝麻點一樣分布在細胞上, 如下面幾張照片


Adenovirus (HEp-2細胞)染Pan-EV的螢光染色, 出現的非特異性的螢光亮點



Adenovirus (HEp-2細胞)染Pan-EV的螢光染色, 出現的非特異性的螢光亮點 (20X)


Adenovirus (HEp-2細胞)染Pan-EV的螢光染色, 出現的非特異性的螢光亮點

                                                                                           



Enterovirus在RD細胞上造成的CPE


Enterovirus在RD細胞上造成的CPE是變圓變小, 久了會變成細碎狀, 懸浮在培養液中


Enterovirus在RD細胞上造成的CPE



Enterovirus在RD細胞上造成的CPE




感謝柏彰提供部份照片